日粮添加发酵紫花苜蓿饲喂花鸡研究表明有增强免疫力，肉质口感，鲜度、嫩度更高
摘 要：
试验旨在探究日粮添加发酵紫花苜蓿对金陵花鸡饲喂效果的影响。选取144羽60日龄、健康且体重相近的金陵花鸡，随机分为3组，每组4个重复，每个重复12羽鸡。CK组、LM5组、LM8组分别在基础配合日粮中分别添加0、5%、8%发酵紫花苜蓿。正式试验期71 d。结果显示：与CK组相比，LM5组和LM8组金陵花鸡的料重比、平均日采食量显著降低（P<0.05）。与 CK 组相比，LM5 组和 LM8 组金陵花鸡血清白细胞计数（WBC）、平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）显著降低 （P<0.05），平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白含量（MCH）、红细胞体积分布宽度CV（RDW-CV）、红细胞体积分布宽度SD（RDW-SD）、血小板计数（PLT） 显著提高 （P<0.05）。与CK组相比，LM5组与LM8组金陵花鸡的脾脏系数显著提高 （P<0.05）。与CK组相比，LM5组、LM8组金陵花鸡胸肌的粗蛋白质含量显著提高 （P<0.05）；LM5组金陵花鸡胸肌的干物质、粗脂肪含量显著提高（P<0.05）；LM8组金陵花鸡胸肌的粗脂肪含量降低（P<0.05）。与CK组相比，LM5组和LM8组金陵花鸡胸肌亚麻酸、油酸含量显著降低（P<0.05），肌苷酸含量显著提高（P<0.05）；LM8组金陵花鸡胸肌亚油酸含量显著降低33.3%（P<0.05）。发酵紫花苜蓿组金陵花鸡胸肌中共检测到17种氨基酸。与CK组相比，LM5组 和 LM8 组金陵花鸡胸肌天门冬氨酸、苏氨酸含量以及氨基酸总量显著降低 （P<0.05），组氨酸含量显著升高（P<0.05）；LM5组金陵花鸡胸肌丝氨酸、谷氨酸、缬氨酸、赖氨酸含量显著降低（P<0.05）；L8组金陵花鸡胸肌丙氨酸含量显著升高（P<0.05）。研究表明，发酵紫花苜蓿替代部分基础日粮可提高金陵花鸡机体的免疫力，改善肌肉的品质和风味，适宜添加水平为8%。
日粮中应用抗生素为畜牧养殖业、饲料业均创造了一定的效益，但也造成了环境污染、食品安全、细菌耐药性等系列问题。随着 2020 年农业农村部“禁抗令” 颁布，国内畜禽饲料端全面步入禁抗时代，提高了养殖过程中的畜禽死淘率和养殖成本。生物发酵饲料是利用发酵工程技术加工生产的新型饲料产品，微生物选自《饲料添加剂品种目录》所明确的生物资源范围，该类饲料富含益生菌，绿色健康，可平衡畜禽肠道菌群，调节机体免疫水平。因此，在平衡畜牧业可持续发展与环保压力问题时，借助无抗生素添加剂的生物发酵饲料改善上述问题成为养殖业可持续发展的一项新思路。
紫花苜蓿（Medicago sativa）又称“牧草之王”，具有高产、质优、适口、环境适应力强的优点。合理利用有益微生物的发酵作用，将紫花苜蓿变为易采食、易消化、易吸收、无毒、无害的发酵饲料，对节约粮食资源、提高畜禽机体免疫力和产品品质有利。目前，关于发酵紫花苜蓿饲料在猪、牛、羊等家畜方面的研究较多，但应用于家禽养殖生产中的研究鲜有报道。金陵花鸡具有生长速度快、饲料转化效率高、屠宰性能优、抗逆能力强、饲喂成本低、营养价值高等特点。本试验在金陵花鸡日粮中添加一定剂量的发酵紫花苜蓿，探究发酵紫花苜蓿对金陵花鸡生长性能、屠宰性能、肉品质、血常规指标的影响，旨在阐明发酵紫花苜蓿的适宜添加比例，为家禽规模化生产中合理利用发酵紫花苜蓿饲料提供参考。
1、材料与方法
1.1试验材料
金陵花鸡；基础配合饲；发酵紫花苜蓿。
发酵紫花苜蓿制备采用固态法，选择初花期的新鲜紫花苜蓿，经控水，阴干，切割机粗粉碎至约1cm，添加少量玉米粉和增香青贮益生菌微贮剂（主要原料为产朊假丝酵母+枯草芽孢杆菌+乳酸片球菌），充分混匀，装罐，压实，密封防止漏水、漏气，严格厌氧发酵30d，
制成具有结构分明的茎叶、柔软但不粘手、芳香味的发酵苜蓿。微贮剂与紫花苜蓿的混合比例为1∶25000（单位：g），发酵紫花苜蓿的含水量控制在45%~55%。
1.2试验设计
选用60日龄、体重相似且健康的金陵花鸡（母）144羽，随机分为3组，每组48羽，随机分为4栏作重复，每个重复12羽鸡（分4笼饲喂，每笼3羽鸡）。对照组（CK组）鸡饲喂基础配合饲料，LM5组、LM8组鸡分别在第61日龄在基础配合饲料中添加5%、8%发酵紫花苜蓿，替代基础配合饲料部分原料。试验基础日粮为玉米-豆粕型日粮，试验日粮组成及营养水平见表1。
1.3饲养管理
金陵花鸡。饲养管理和常规免疫进行。饲喂方式为笼养，养殖环境通风良好，自然光照，湿度约65%。金陵花鸡自由采食，充分饮水，每日饲喂2次。预试期7d（61~67日龄），正式试验期71d（68~138日龄）。
1.4测定指标及方法
1.4.1生长性能
正式试验期开始和结束时，试验鸡禁食12h，但自由饮水，称重，计算平均日增重。喂食前称取前一次剩料重量，记录当日投料量，计算每日耗料量，根据平均日增重和平均日采食量，计算试验鸡的料重比。
平均日采食量=(总耗料量-总剩料量)/(饲喂天数×饲喂动物数量)
平均日增重=(末重-初重)/饲喂天数
料重比=平均日采食量/平均日增重
1.4.2血常规
试验结束当天，每组选12羽鸡空腹进行前腔静脉采血，采用全自动血细胞分析仪测定血常规指标。检测指标包括：白细胞计数（WBC）、红细胞计数（RBC）、血红蛋白（HGB）、血细胞比容（HCT）、平均红细胞体积（MCV）、平均RBC血红蛋白含量（MCH）、平均RBC血红蛋白浓度（MCHC）、RBC体积分布宽度CV（RDW-CV）、RBC体积分布宽度SD（RDW-SD）、血小板计数（PLT）。
1.4.3屠宰性能
试验结束时，每组选择20羽接近平均体重的鸡，禁食12h，空腹活体称重，颈静脉放血屠宰。检测指标包括：活体重、屠体重、半净膛重、全净膛重、两侧腿肌重、两侧胸肌重、腹部脂肪重、脾脏重量，计算屠宰率、半净膛率、全净膛率、胸肌率、腿肌率、腹脂率和脾脏系数。屠宰标准实施。
屠宰率=屠体重/活体重×100%
全净膛率=全净膛重/屠体重×100%
肝脏系数=器官重量/全净膛重×100%
1.4.4肉品质
取鸡同侧胸肌200g、切碎，置于冻干机冻干，粉碎，过0.425mm筛，测定肌肉品质指标，包括肌肉的感官性状、常规营养成分和风味物质含量。
肌肉感官性状指标包括：肉色、pH值、滴水损失、剪切力。滴水损失：顺沿胸肌纤维纹理取待测肉片样品（长4cm、宽2cm、厚1cm），0~4℃悬挂24h，称量悬挂前后肉片重量并记录，计算肉片失水率。注意悬挂操作在密封的滴水测定管中进行，保持肉片与管壁不接触。肉色采用肉色仪测定，在屠宰后立即进行。肌肉pH值测定采用便携式pH计，在屠宰后24h进行。剪切力是用取样器取待测肉样，中心部位插入温度计，80℃水浴锅中待肉样中心温度加热至70℃时取出，冷却至室温，利用嫩度仪剪切，记录测量值。取肉样过程要求去除筋膜、脂肪等多余物质，顺胸肌纤维取样，样品保持形状相同重量相近。测定肉色、pH值、剪切力时，每个肉样测3次，取平均值。
肌肉常规营养成分指标包括干物质、粗蛋白质和粗脂肪含量。屠宰后，对胸肌肉样先进性低温冷冻干燥处理，粉碎肉样，按照常规方法测定。肌肉风味指标包括亚麻酸、亚油酸、油酸、肌苷酸及氨基酸含量。利用氨基酸自动分析仪检测肌肉中游离氨基酸含量，采用气相色谱仪质谱仪测定肌肉中亚麻酸、亚油酸、油酸含量，采用液相色谱仪测定肌肉中肌苷酸含量。
1.5数据统计与分析
数据采用Excel 2016软件进行预处理，SPSS25.0进行单因素方差分析，最小显著差异（LSD）法进行多重比较。结果以“平均值±标准误”表示，P<0.05表示差异显著。
2、结果与分析
2.1发酵紫花苜蓿对金陵花鸡生长性能的影响（见表2）
由表2可知，与CK组相比，LM5组和LM8组金陵花鸡的料重比分别显著降低了5.31%和7.52%（P<0.05），平均日采食量分别显著降低了7.37%和10.18%（P<0.05）。
2.2发酵紫花苜蓿对金陵花鸡血常规指标的影响（见表3）
由表3可知，与CK组相比，LM5组和LM8组金陵花鸡血清WBC、MCHC显著降低（P<0.05），MCV、RDW-SD、RDW-CV、PLT显著提高（P
2.3发酵紫花苜蓿对金陵花鸡屠宰性能的影响（见表4）
由表4可知，与CK组相比，LM5组与LM8组金陵花鸡的脾脏系数分别显著提高了28.6%、14.3%（P<0.05）。
2.4发酵紫花苜蓿对金陵花鸡肉品质、风味和营养成分的影响（见表5~表7）
由表5可知，各组间金陵花鸡胸肌的肉色、滴水损失、剪切力、pH值差异均不显著（P>0.05）。与CK相组比，LM5组、LM8组金陵花鸡胸肌的粗蛋白质含量分别提高了0.5%和0.8%（P<0.05）；LM5组鸡胸肌的干物质含量提高了0.5%（P<0.05），粗脂肪含量提高了13.3%；LM8组鸡胸肌粗脂肪含量降低了17.0%（P<0.05）。
由表6可知，与CK组相比，LM5组和LM8组金陵花鸡胸肌亚麻酸含量分别显著降低了9.4%和43.8%（P<0.05），油酸含量分别显著降低了18.4%和25.0%（P<0.05），肌苷酸含量分别显著提高了5.3%和3.9%（P<0.05）。与CK相比，LM8组金陵花鸡胸肌亚油酸含量显著降低了33.3%（P<0.05）。
由表7可知，试验组金陵花鸡胸肌中共检测到17种氨基酸。与CK组相比，LM5组和LM8组金陵花鸡胸肌天门冬氨酸、苏氨酸含量显著降低（P<0.05），组氨酸含量显著升高（P<0.05）。与CK组相比，LM5组金陵花鸡胸肌丝氨酸、谷氨酸、赖氨酸含量显著降低（P<0.05）；LM8组金陵花鸡胸肌丙氨酸含量显著升高（P<0.05）。与CK组相比，LM5组金陵花鸡胸肌氨基酸总量降低了2.6%（P<0.05），LM8组胸肌氨基酸总量增加了2.0%（P<0.05）。
3、讨论
3.1发酵紫花苜蓿对金陵花鸡生长性能的影响
家禽养殖过程中，可以在日粮中添加发酵饲料替代抗生素，从而改善家禽的生长性能。研究表明，发酵饲料可显著提高蛋鸡的平均日增重，显著降低料蛋比；发酵豆粕替代日粮中普通豆粕可显著提高黄羽肉鸡的体增重，以添加量9%组料重比最低。也有研究表明，日粮中添加6%、8%的紫花苜蓿草粉，和田黑鸡的平均日增重降低，料重比显著增加；日粮中添加2%、4%的紫花苜蓿草粉，和田黑鸡的平均日增重增加，料重比降低。本研究中，日粮添加发酵紫花苜蓿后，各组金陵花鸡的体重、平均日增重、料重比均降低，但仅有料重比差异显著，与上述结论不完全一致。本研究表明，日粮添加发酵紫花苜蓿替代部分基础日粮，金陵花鸡的饲料报酬和生长性能显著提高。原因可能是经发酵的紫花苜蓿中营养物质由大分子状态被分解为小分子状态，金陵花鸡对紫花苜蓿的消化吸收速率提高，利于生长性能的提高。本研究中，日粮中发酵紫花苜蓿添加剂量为8%时为宜，其原因有待进一步探索。
3.2发酵紫花苜蓿对金陵花鸡血常规指标的影响
血清样品内的WBC、RBC可反映生物有机体的新陈代谢、蛋白合成、分解、吸收能力和免疫力的状况，WBC高于正常范围表明生物有机体存在炎症反应。本研究发现，WBC与发酵紫花苜蓿添加剂量呈显著线性关系，发酵紫花苜蓿添加剂量越高，金陵花鸡体内的WBC越少，与发酵葛藤饲喂金陵花鸡的研究结果不一致。本研究中，对照组和发酵紫花苜蓿添加剂量为5%时，金陵花鸡体内的WBC均超过鸡的正常参考范围；而发酵紫花苜蓿添加剂量为8%时，金陵花鸡体内的WBC均处于鸡的正常参考范围，表明饲喂基础混合饲料和添加5%发酵紫花苜蓿时，金陵花鸡体内存在炎症，日粮中添加8%发酵紫花苜蓿时，金陵花鸡体内炎症消失，且个体生长、健康状况均良好，可见WBC增加可能是日粮中发酵紫花苜蓿添加剂量为8%时金陵花鸡体内免疫力较高的体现。原因可能是紫花苜蓿含有多糖、皂苷等物质，可调节提高细胞的免疫水平、巨噬细胞的吞噬能力，提高鸡的免疫力。
3.3发酵紫花苜蓿对金陵花鸡屠宰性能的影响
屠宰性能反映畜禽各器官构建与可食部分的比例，可作为度量肉鸡营养和生产性能的重要指标，是直接影响养殖经济效益的指标。研究表明，发酵饲料可提高肉鸡的全净膛率、半净膛率、胸肌率、腿肌率，降低腹脂率。本试验中，各试验组金陵花鸡的屠宰性能差异不显著，与上述研究结果不完全一致，但日粮添加发酵紫花苜蓿后，试验鸡胸肌的腹脂率、屠宰率具有降低趋势，全净膛率、半净膛率、腿肌率等屠宰性能呈提高的趋势。腹脂率降低的原因可能是紫花苜蓿含有的黄酮类物质抑制了鸡脂肪的沉积。免疫器官系数直接反映免疫器官的生长发育状况，间接表征畜禽机体的免疫力状况。免疫器官系数越大，代表免疫力越高。发酵饲料在畜禽养殖的应用研究表明，发酵豆粕、菜籽、紫花苜蓿等饲料添加可增加家禽的法氏囊、脾脏、胸腺等免疫器官的系数。本研究结果与此相似，日粮添加发酵紫花苜蓿的试验鸡的脾脏系数显著增加，表明试验鸡的免疫力显著增加，可能与紫花苜蓿含有的多糖、皂苷及其他未知生长因子有关。
3.4发酵紫花苜蓿对金陵花鸡品质和风味的影响
本研究选用肉色、pH值、滴水损失、剪切力等5个指标度量鸡肉品质。肉色是判定肉品质最直观的性状，可综合反映肌肉变化。研究表明，发酵葛藤替代部分基础日粮可降低金陵花鸡的肉色。紫花苜蓿草粉可以提高和田黑鸡胸肌肉色。本结果表明，日粮添加发酵紫花苜蓿，肉色改变不明显，与上述研究结果均不一致。肌肉pH值是评定肉品质的关键指标，用于衡量屠宰后肌肉的酸度，与畜禽屠体肌肉中肌糖原的酵解速率相关，直接影响肌肉的嫩度、系水力、肉色等品质指标。肌肉pH值越低，酸度越大、肉色越浅、肉质越松软、肉越易腐烂。研究表明，紫花苜蓿草粉和发酵饲料均可提高肉鸡胸肌、腿肌pH值。
本试验中，金陵花鸡胸肌的测定结果与上述结论一致，发酵紫花苜蓿添加可提高金陵花鸡胸肌的pH值，但差异不显著，表明日粮添加发酵紫花苜蓿，降低了鸡胸肌的酸度。剪切力可以反映肉质鲜嫩度，是评定肌肉口感和品质的重要参数。剪切力越小，鸡肉的嫩度越好，口感越好。研究表明，发酵饲料可以降低胸肌、腿肌的剪切力；紫花苜蓿草粉可以降低和田黑鸡的剪切力，本研究结果与上述结论不完全一致。本研究中，胸肌的剪切力组间差异不显著，但LM8组<CK组<LM5组，表明日粮添加8%发酵紫花苜蓿的试验组胸肌肉质口感更好，鲜嫩度更高。通常采用滴水损失度量系水力。外力作用下，肌肉蛋白质保持水分的能力，称为系水力。肌肉的系水力与肉品的贮藏质量、加工效益、肌肉的嫩度密切相关。肌肉滴水损失愈低，系水力却越高，肌红蛋白的流失越少，肌肉表面干燥，而肉多汁、鲜嫩，感官效果更佳。本研究中，各组鸡胸肌的滴水损失差异不显著，但LM5组<LM8组<CK组，表明日粮添加发酵紫花苜蓿，金陵花鸡胸肌系水力更高，肌红蛋白的流失量更少，更多汁鲜嫩，口感更佳，与日粮中添加紫花苜蓿草粉和添加发酵饲料的结论基本一致。
肌肉中不饱和脂肪酸的含量越高，肉越易氧化，容易发生异味。本研究发现，与CK组相比，日粮添加发酵紫花苜蓿，金陵花鸡胸肌的亚麻酸、亚油酸（多不饱和脂肪酸）和油酸含量（单不饱和脂肪酸）显著降低，且LM5组>LM8组，表明日粮中添加发酵紫花苜蓿可显著降低金陵花鸡胸肌的不饱和脂肪酸含量，改善鸡肉风味，与已有的发酵饲料在养殖方面的应用研究结果基本一致。本研究还发现，日粮添加发酵紫花苜蓿，金陵花鸡胸肌粗蛋白含量具有上升趋势，与肉兔饲喂试验的结果一致。
肉制品游离氨基酸和肌苷酸含量主要影响口感。鲜味受肌苷酸的影响最强，肌肉中肌苷酸含量愈高，肉质越鲜美。本研究中，与CK组相比，日粮添加发酵紫花苜蓿可使试验鸡胸肌中的肌苷酸含量更高，表明肉质风味更鲜美，与发酵葛藤在鸡中应用的结论基本一致。氨基酸是肉质的关键营养物质，也是决定肉质鲜味的成分。研究表明，日粮中添加发酵饲料，畜禽肌肉中氨基酸总量、鲜味氨基酸含量、必需氨基酸含量增加。本研究结果与此相似，与CK组相比，LM8组金陵花鸡胸肌中氨基酸总量、赖氨酸、丙氨酸、甘氨酸、谷氨酸、组氨酸含量显著增加，苯丙氨酸、精氨酸、丝氨酸、脯氨酸、亮氨酸、酪氨酸含量呈增加趋势，表明日粮中添加发酵紫花苜蓿可提高鸡胸肉中多种游离氨基酸的含量。原因是紫花苜蓿经发酵后可分解出大量氨基酸，进而有利于鸡对日粮的消化吸收；但由于发酵紫花苜蓿添加量甚微，导致多种氨基酸在组间差异不明显。本研究还发现，日粮中添加发酵紫花苜蓿，除人体必需和鲜味氨基酸含量增加外，苦味氨基酸缬氨酸含量呈降低趋势，是日粮添加发酵紫花苜蓿组鸡胸肉风味更佳的原因之一。
4、结论
本研究条件下，日粮中添加8%的发酵紫花苜蓿为宜，金陵花鸡血清WBC降至正常参考范围内，机体炎性消失，免疫力增强，胸肌肉质口感更好，鲜度、嫩度更高。
将粉碎的牧草进行发酵不仅营养更高、适口性更好，最关键在牧草产量旺季可以储存
1.添加部分玉米等淀粉类原料促进发酵的方法
将青绿牧草、秸秆等通过机器粉碎（原则上越细越好），每2吨粉碎的牧草秸秆等加入20-50公斤玉米（淀粉、大米粉等都可，原则上越多越好）、“99多功能饲料发酵剂”1包（市场价格约25元/包）或3包“加强型活力99生酵剂”，混合含水量在55%-70%均可，装入池、缸、袋等容器中压实并进行密封发酵。7-15天有浓郁的香醇味即可饲喂，喂多少取多少并马上进行密封。
这种技术通过添加玉米粉为促进发酵饲料的技术，成本稍高但营养较高，饲喂效果较好，原料很容易解决。
2、添加糖蜜促进发酵的技术
将青绿牧草、秸秆等通过机器粉碎（原则上越细越好），每2吨粉碎的牧草秸秆等加入50-100公斤糖蜜（糖厂的下脚料，添加量越多效果越好）、“99多功能饲料发酵剂”1包（市场价格约25元/包），混合含水量在55%-70%均可，装入池、缸、袋等容器中压实并进行密封发酵。7-15天有浓郁的香醇味即可饲喂，喂多少取多少并马上进行密封。
这种技术通过添加糖蜜为促进发酵饲料的技术，成本低且营养也较好，适口性更好，但糖蜜的原料不容易找。
部分发酵饲料养鸡效果好，节约饲料鸡场不臭肉质好
肉质嫩滑
发酵饲料的使用技术
发酵饲料的使用技术
发酵饲料在饲喂猪鸡鸭单胃动物上不可以全部使用，否则会导致胃酸过多等情况，且营养也不全面。
要遵循先少量逐渐增多的原则，且发酵饲料发酵时间越长，使用量越要减少使用量（时间越长酸度越大），具体使用案例如下：
1.猪鸡鸭等单胃动物将发酵饲料作为益生菌使用添加量：只要在饲料中添加1%以上即可达到较好效果，建议在3%左右效果更好。
2.作为替代部分饲料的使用量：从5%开始，肉猪、肉鸡等使用量最高使用量不建议超过30%，土猪、野猪、香猪等最高不建议超过50%；母猪在后备、空怀、怀孕前期可以使用30%-50%，怀孕后期与哺乳期建议控制在10%左右；蛋禽建议不高于15%。
3.刚刚发酵完成的发酵饲料与发酵时间较长的发酵饲料使用量是不一样的，建议是发酵完成后（有浓郁香醇味）就最好在一周内饲喂完成，这时候的适口性、营养等较好，且使用量可以增加。
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